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如何更好的獲得細菌基因組DNA/RNA?慧慶實驗成果分析

時間:2023-09-14 15:59:36 來源:洛陽慧慶生物科技有限公司
  核酸是重要的生物信息分子,是分子生物學的主要研究對象之一。利用核酸提取試劑提取細菌基因組DNA/RNA可用于PCR擴增、分子雜交、核酸檢測分析、基因突變檢測和測序等,而核酸提取的質(zhì)量對實驗結果的準確性影響很大。那么如何更好的獲得細菌基因組DNA/RNA?慧慶生物結合具體的實驗成果為大家分析一下。
  

  實驗論證:如何更好的獲得細菌基因組DNA/RNA

  
  1.實驗目的
  
  用自動核酸提取純化儀能夠成功提取細菌基因組DNA,并獲得較好的電泳條帶。
  
  2.實驗儀器及試劑
  
  儀器:臺式離心機(SIGMA)、超微量分光光度計(Q5000)、電泳儀(北京六一儀器廠,DYY-7C型)、自動核酸提取儀(LJbio32H)
  
  試劑:細菌基因組DNA提取試劑盒(磁珠法、預分裝)
  
  3.實驗方法
  
  (1)樣本處理:取過夜培養(yǎng)的細菌100~1000 μL(細胞數(shù)為108-109)至1.5 mL 離心管中10000g離心2min,吸棄上清,再加入200 μL EB重懸菌體備用。
  
  (2)按照試劑盒說明書手工操作,提取細菌基因組DNA。
  
  (3)優(yōu)化自動核酸提取純化儀的上機參數(shù)(①65℃裂解,8min ②65℃裂解,10min ③室溫裂解,10min)。
  
  (4)用超微量分光光度計測量提取的DNA,并進行電泳檢測。
  
  4.實驗結果
  
  (1)在超微量分光光度計上用EB潤洗點點空白,取1-2 μl的洗脫產(chǎn)物檢測,記錄各個波長的吸光度,得到的數(shù)據(jù)如下:
  
  表1  核酸提取純化儀提取結果
  

序號

A260/A280

A260/A230

Conc(ng/μL)

備注

1.

1.98

1.51

186.6

658min4

2.

1.95

1.42

183.7

3.

1.92

1.39

163.3

6510min4

 

4.

2.02

1.69

150.1

5.

1.76

0.95

176.9

室溫10min4

 

6.

1.89

1.24

380.6

  備注:加底紋的電泳
  
  (2)在1%的瓊脂糖凝膠上加入6μL洗脫的基因組DNA/擴增產(chǎn)物/DNA Marker進行電泳,結果如下:
  電泳結果
  M:DL2000Ladder
  
  1:65℃裂解,8min;2-3: 65℃裂解,10min;4-5: 常溫10min
  
  5.分析與討論
  
  (1)由濃度測量結果和產(chǎn)物電泳圖可知,三種提取條件下純度與純度稍有差異,室溫裂解條件下,電泳結果點樣孔有滯留,裂解效果比其他兩種稍差,但也有明顯DNA帶與兩條RNA條帶。
  
  (2)電泳圖編號4 的DNA條帶略暗,與測量結果也能對應起來,分析原因是提取所用耗材此孔位對應的磁棒套稍長一點,儀器提取過程中磁棒套攪拌過程中影響其裂解效果,導致此孔提取核酸測量值與電泳結果稍差。
  
  (3)對比三種程序提取效果,65℃裂解8min的測量值較均一,重復性較好,DNA條帶最亮。
  
  如何更好的獲得細菌基因組DNA/RNA?看了以上的實驗過程以及結果分析,相信大家已經(jīng)有了更深入的認識。洛陽慧慶生物生產(chǎn)的細菌基因組DNA提取試劑(磁珠法)核酸提取成功率更高、價格適中,受到高校及科研單位用戶的好評。如您有相關疑問或者采購需求,請留言或者電話聯(lián)系我們。
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